可能原因：

• 基质（Matrigel、Laminin、Vitronectin 等）浓度不足或失活

• 传代方法过于粗暴，细胞损伤严重

• ROCK 抑制剂未使用或撤掉过早

解决思路：

• 确保基质正确稀释与铺板，避免冻融过多次

• 建议使用 EDTA 温和消化，避免完全单细胞化，酶消化对于细胞损伤较大，长期也容易导致分化

• 一般复苏时要加入ROCK抑制剂，帮助细胞第一天贴壁，后续换液就可以不再加入，如果后续仍出现贴壁不良的情况，也可以尝试继续在培养基中加入ROCK抑制剂

健康的hPSC核/质比高，核仁明显，多个核仁，能形成紧凑的克隆团，细胞扁平且密集，克隆团边缘清晰光滑。下图是Stem-Ex hPSC维持培养基培养的H9细胞。

可能原因：

• 培养基失效或成分不均一

• 培养密度过低或过高，细胞间信号失衡

• 传代间隔过长，细胞过度融合

解决思路：

• 确保培养基新鲜，不超过2周，冻存组分不能反复冻融

• 合理控制接种密度（一般 20–40% 汇合度最佳）

• 保持 3–5 天传代，避免过度长时间培养

常见的多能性指标有SSEA4，Tra-1-60等，在Stem-Ex hPSC维持培养基中，多代培养后，hPSC的多能性指标超过99%。